邮电部关于印发邮政特快专递业务跟踪查询系统总体方案及技术业务规范的通知
作者:法律资料网 时间:2024-07-22 12:28:29 浏览:9174
来源:法律资料网
下载地址: 点击此处下载
邮电部关于印发邮政特快专递业务跟踪查询系统总体方案及技术业务规范的通知
邮电部关于印发邮政特快专递业务跟踪查询系统总体方案及技术业务规范的通知
1991年9月29日，邮电部
现将邮政特快专递业务跟踪查询系统总体方案及技术业务规范随文印发各局，并就有关事宜通知如下：
一、总体技术方案及技术、业务规范是开发建设全国邮政特快专递跟踪查询系统的规范性文件，各地在开发建设中均应遵守。确有必要变动时，必须按程序经过批准，以保证全网的一致性、互通性。
二、该项目为涉及全国各局的一项较大工程，各单位应以全网的利益为重，加强领导，服从统一指挥，积极调配人力和资金。各局建点所需的长途直拨电路，部邮政速递业务管理中心和京、沪、穗三个交换中心所需的分组交换网的入网端口以及市话专线等，各有关电信部门应优先解决。在开发试验阶段，自调通电路之日起，开始计为试运行期。试运行期限为六个月，免收通信费用。六个月后的次日起，开始按规定计费。
三、部承担项目开发建设中一级干线的相关费用，在邮政新技术开发费中列支。在开发建设中，需各局自己配套、扩容、深度开发等需要的资金，由各局自筹解决，应予以保证。
四、项目开发建设的计划、实施步骤、组织措施、费用安排及各局应立即着手做的工作等，已在总体方案以及邮政〔1991〕52号“关于印发邮政特快专递业务跟踪查询系统可行性方案的通知”和邮政〔1991〕179号“关于附发《邮政特快专递业务跟踪查询系统项目领导小组第一次扩大会议纪要》的通知”中明确，各局应遵照执行。除担负开发任务的北京、上海、广州等局应按计划抓紧工作外，第一批要上的站点局也应立即按规范要求准备机房、电源、电话线路，并组织培训相关人员。
五、开发建设邮政速递业务跟踪查询系统是实现邮政“三个转变”，提高管理水平，提高服务质量，提高竞争能力，体现科学技术是第一生产力的一项重要工程。希望各有关单位和从事开发建设的技术、业务人员，团结协作，共同努力，克服困难，按时完成任务，为实现邮政现代化做出贡献！
附件：一、邮政特快专递业务跟踪查询系统总体方案及附录
（略）
二、邮政特快专递业务跟踪查询系统技术规范及附录
（略）
三、邮政特快专递业务跟踪查询系统业务规范及附录
（略）
下载地址: 点击此处下载
关于印发《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》等技术规范的通知
关于印发《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》等技术规范的通知
卫办医政函〔2013〕402号
各省、自治区、直辖市卫生厅局（卫生计生委），新疆生产建设兵团卫生局：
根据人感染H7N9禽流感疫情联防联控工作机制会议议定事项及《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号，以下简称《通知》）精神，为指导医院做好人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作，我委组织制定了《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》（附件1），并委托中国疾控中心制定了《人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求》（附件2）等技术规范。现转发给你们（可从国家卫生和计划生育委员会网站医政管理栏目中下载），供医院在开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。
各省级卫生（卫生计生）行政部门要按照《通知》有关要求，组建省级疾控机构实验室和省级临床检验专家共同组成的专家组，对医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作提供技术指导和支持，负责医院实验室核酸检测质量控制工作。要组织本辖区人感染H7N9禽流感病毒核酸检测定点医院检验人员进行培训，认真学习掌握相关要求，提高检验人员技术能力和水平。医院开展病毒核酸检测时，应当按照技术规范有关要求，规范开展检测工作，重视实验室质量控制，保障实验室生物安全，做好检验人员职业防护，保证检测结果科学、可靠。
附件：1.医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序.docx
2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书.docx
国家卫生和计划生育委员会办公厅
2013年5月16日
医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序
一、目的
确保人感染H7N9禽流感病毒核酸检测过程标准化、规范化，降低人为不规范操作对检测结果造成的影响，保证结果的准确性和可重复性。
二、适用范围
医疗机构临床基因扩增检验实验室按照《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号）和《关于做好医疗机构人感染H7N9禽流感检测试剂供给保障工作的通知》（卫发明电〔2013〕29号）有关要求，使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作。
三、样本采集、运送和保存
尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道样本包括痰液、气管吸取物、肺洗液、肺组织等)。可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。患者有下呼吸道样本时，应优先采集。
根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采集标准操作程序（SOP），并组织样本采集人员进行培训及考核。样本的采集应当严格按照SOP进行。
样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即送往实验室。若气温高时，需放入冰块降温。样本抵达实验室后，应尽快进行检测，24小时内能检测的样本可置于2～8℃暂时保存，24小时内无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。如无-70℃保存条件时，可于-20℃冰箱暂存。样本避免反复冻融。
样本采集、处理、运输及保存不当时，可因病毒RNA降解出现假阴性结果，也可因为样本“污染”出现假阳性结果。
四、PCR检测
（一）样本处理
样本的核酸提取应当在样本处理区进行。按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。样本应尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA降解。提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜内进行加样、提取过程中，为防止RNA降解，可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。提取好的RNA应及时用于检测，否则应当-70℃保存。如无-70℃保存条件，可于-20℃冰箱暂存。
（二）试剂准备
试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒，样本可进行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亚型或H7N9病毒核酸的检测。试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进行。除酶混合物外，其它试剂在使用前应当在室温充分复融，混匀并瞬时低速离心。反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管内溶液泄露污染仪器。分装有扩增反应液的反应管应当扣盖或装入密实袋内再转移至样本处理区。
（三）加样
加样应当在样本处理区进行。加样时应当使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。
按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。
（四）PCR扩增检测
PCR扩增检测在扩增区进行。待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。
（五）结果分析
根据所用试剂盒说明书设置基线值（baseline）。荧光阈值（threshold）设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数（或显示为undet）。使用仪器配套软件自动分析结果。
（六）质量控制
检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本（多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效），随机放在所检测标本的中间。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。阴性质控样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。
试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。
（七）实验结果的判定与解释。
按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。
五、检测结果报告
按照试剂盒说明书进行。
六、其它注意事项
（一）人感染H7N9禽流感病毒实验室活动、样本采集和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。从事人感染禽流感检测的技术人员必须经过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须采取生物安全防护措施（使用眼罩、N95型口罩等）。样本核酸提取必须在Ⅱ级生物安全实验室，经过年检合格的二级生物安全柜内进行。实验室应具有良好的通风。
（二）注意仪器设备的日常和定期维护，加样器、扩增仪和温育设备应进行定期校准。试剂盒及一次性使用的无DNA酶和RNA酶PCR反应管、离心管、带滤芯吸头等应进行每批质检。
（三）实验应严格分区操作；各区物品、工作服等均应当专区专用，不得交叉使用。实验后应及时清洁工作台，以防污染。
（四）每批实验室后，可采取实验室通风、10%次氯酸钠溶液擦洗地台面、紫外照射等措施，消除可能存在的扩增产物气溶胶污染。
（五）使用中国疾控中心制备试剂开展检测工作时，可参考相应试剂盒说明书（见附件1、2）有关要求。
附件：1.H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书
H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
【产品名称】
通用名称：H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）
英文名称：Diagnostic Kit for H7N9 subtype avian flu virus RNA（Fluorescence PCR）
【包装规格】48人份/盒。
【预期用途】
本试剂用于对咽拭子样本中H7N9亚型禽流感病毒RNA进行定性检测，用于H7N9禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。
【检验原理】根据荧光PCR技术原理，针对H7N9亚型禽流感病毒的HA基因和NA基因设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对H7N9亚型禽流感病毒RNA的定性检测。试剂盒以正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA为正常人体细胞对照，对提取和检测过程进行监控。
【主要组成成分】
名称 成分 规格 数量(管)
H7反应液 含内标RNP 、H7亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
N9反应液 含内标RNP 、N9亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
DNA聚合酶 DNA聚合酶，不可用其他同类DNA聚合酶替代 60μl /管 1
逆转录酶 逆转录酶，不可用其他同类逆转录酶替代 60μl /管 1
阳性对照 RNP、H7、N9 RNA假病毒混合物 1.0ml/管 1
阴性对照 DEPC水 1.0ml/管 1
本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行互换。
本品不包含，但对试验必须的设备和试剂：
生物安全柜、台式离心机、旋涡震荡器、拭子、采样管、无菌病毒采样液、1.5 ml无核酸酶的离心管、全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法，北京金豪制药股份有限公司，Cat：BJH101)。
【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存，有效期2个月，阳性对照反复冻融次数不得超过5次。
【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。
【样本要求】
1. 样本类型：咽拭子。推荐使用金豪公司生产的微生物采样及运送管（12人份/盒）。
2. 拭子、采样管和保存液：
2.1拭子选择：应使用头部为合成纤维（例如，聚酯纤维），杆部为铝或塑料的拭子。
2.2采样管：外螺旋口、耐-70℃冻存，可容纳3 ml病毒采样液。
2.3无菌病毒采样液：应含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生产的抗生素，缓冲液，经无菌处理。
3.样本采集、运输和保存：
由于H7N9亚型禽流感病毒为呼吸道传播病毒，有关生物安全应按照“《人间传染的病原微生物名录》”中高致病性禽流感病毒进行管理。
3.1采集：采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测。用微生物采样及运送管内的采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。4℃暂存并在48小时内送达实验室。
3.2保存和运输：新鲜采集样本应在4℃条件下48小时运送到检测实验室。保存样本可在-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。冷冻样本应在冷冻条件下送至实验室。运输时在包装箱内填充吸水材料，运输过程中保持标本采集管直立状态，不能倾斜。
样本送至实验室后，立即进行处理和分装，避免反复冻融。临床样本保存在4℃不能超过4天。
4.咽拭子标本的处理
咽拭子要在标本保存液中充分搅动（至少 40 下），以洗脱拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，用于病毒分离时，需要冻融一次（防止多次冻融），使细胞破裂，释放病毒颗粒。然后在4℃条件下，10000rpm离心20分钟，用上清接种细胞或直接提取RNA。如果发现有细菌污染，须用滤器过滤除菌。
【检验方法】
1. 核酸提取：
取200μl咽拭子样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法)，该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取，并按试剂盒说明书要求操作。
本品的阳性对照和阴性对照均参与核酸提取。
1.1. 准备及注意事项：
1.1.1 分别在洗液A瓶和洗液B瓶中加入16ml和60ml无水乙醇，颠倒充分混匀，并在瓶身上加以标识。
1.1.2 吸取所需的洗脱液，加至一无核酸酶的eppendorf管中，于70℃预热。
1.1.3 冷冻样本应室温融化，轻微震荡混匀后使用。
1.1.4 区分操作中的离心设置（rpm和g），本产品操作过程均为室温离心。
1.1.5 助沉剂在低温保存时可能呈胶状，吹打混匀即可使用。
1.2. 样本裂解及核酸吸附
1.2.1 在1.5ml无核酸酶的离心管中加入10μl助沉剂和400μl裂解液，加入200μl待处理样本，剧烈震荡2分钟，室温静置10分钟。
注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变助沉剂、裂解液以及无水乙醇体积。体积大于400μl样本应分多次进行处理。
1.2.2 加入480μl无水乙醇，颠倒混匀，吸取600μl裂解混合物转移到核酸吸附柱中。
注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变乙醇用量。
1.2.3 3500g离心2分钟，取下套管，倒掉套管中的液体。将剩余裂解混合物转移至核酸吸附柱，重新离心一次，弃套管中的液体。
1.2.4 将核酸吸附柱重新装入套管，6000g离心1分钟，倒掉套管中的液体。
1.3. 核酸纯化
1.3.1 将核酸吸附柱重新装入套管，在核酸吸附柱中加入500μl洗液A，6000g离心1分钟，将核酸吸附柱装入一个干净套管中。
1.3.2 在核酸吸附柱中加入500μl洗液B，静置1分钟，6000g离心1分钟。
1.3.3 倒掉套管中的液体，将核酸吸附柱重新装入套管。
1.3.4 重复一次1.3.2步骤(本步骤不用静置1分钟)。
1.3.5 将核酸吸附柱换一新套管，13000rpm离心3分钟。
1.4. 核酸洗脱
1.4.1 将核酸吸附柱装入一无核酸酶1.5ml离心管，小心在吸附膜中央加入50μl预热洗脱液，室温静置4分钟。
1.4.2 10000 rpm离心2分钟，离心管中液体即待测样本RNA。
2. PCR扩增：
2.1 实验设计：
2.1.1待检样本检测：每份样本分别使用2种反应液（H7和N9反应液）进行检测，综合2种反应液的检测结果对样本进行判定。
2.1.2对照品检测：每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。
2.2反应体系的配制：
2.2.1准备工作：将2种反应液（H7和N9反应液）融化后振荡混匀，离心6000rpm 10秒。
2.2.2 2种反应体系（H7和N9）的配制：取2个1.5ml 无核酸酶离心管，计算待测样本数量(n)，分别取20μl×（n+2）反应液（H7和N9）、0.5μl×（n+2）DNA聚合酶和0.5μl×（n+2）逆转录酶充分混匀，离心6000rpm 10秒。
n + 2 = n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照；
2.3反应体系分管：
每份待测样本设置2个PCR扩增管（H7和N9），分别将每种反应体系按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中。
2.4加样：
每份待测样本RNA、阳性对照、阴性对照以5μl/管分别加入2个PCR扩增管中。
2.5扩增检测：
将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测，不同仪器的设置如下：
2.5.1全自动荧光定量PCR检测仪（RG3000、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型）扩增程序：
对于ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光定量PCR检测仪，荧光信号设置为：Reporter Dye1：FAM、JOE/VIC，Quencher Dye1：NONE，Passive Reference：NONE。其他型号仪器可设置为FAM和HEX通道。荧光PCR扩增程序的设置见表1。反应总体积为25μl。
表1.荧光PCR扩增程序
步骤 反应温度 时间 是否采集光 循环数
逆转录及变性 50℃ 30分钟 否 1
95℃ 3分钟 否
预扩增 95℃ 15秒 否 5
50℃ 30秒 否
72℃ 1分钟 否
扩增及荧光收集 95℃ 10秒 否 40
55℃ 40秒 是
2.5.2 全自动荧光定量PCR仪（Roche LightCycler系列）扩增程序：
选择FAM、HEX通道收集荧光。荧光PCR扩增程序见表2。
表2.荧光PCR扩增程序
步骤 反应温度 时间 是否采集荧光 循环数
逆转录及变性 50℃ 30分钟 否 1
93℃ 3分钟 否
预扩增 93℃ 15秒 否 5
50℃ 30秒 否
72℃ 1分钟 否
扩增及荧光收集 93℃ 10秒 否 40
55℃ 40秒 是
3. 结果分析：
3.1本品H7荧光探针的报告荧光为FAM，N9荧光探针的报告荧光为FAM，RNP荧光探针的报告荧光为HEX。所以应选择FAM通道和HEX通道分析试验结果。
3.2 基线（Baseline）范围根据仪器要求设定，目的为校正背景荧光干扰，终止循环（End）一般设置为最强样本出现扩增信号的前3-4个循环。
3.3 阈值线用于判断样本是否扩增，应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号，或点击分析（Analysis）自动获得。
4. 质量控制：
每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立。
4.1阴性对照无Ct值或Ct值为0。
4.2 阳性对照Ct值小于30.0。
【参考值（参考范围）】
Ct值≤37.0报告该反应阳性；
无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；
37.0＜Ct值＜40.0为灰区；
内标RNP有效的范围为：0＜Ct值＜33.0；
【检验结果的解释】
1. 在内标RNP结果成立的条件下各种判读模式如下：
反应液 模式1 模式2 模式3 模式4
H7 - - + +
N9 - + - +
RNP + + + +
结果判断 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阳性
注：在内标RNP结果不成立的条件下视为检测异常，应重新采样检测。
2. 结果在灰区的样本需重复试验：取200μl样本重新提取RNA（核酸分离试剂盒中裂解液、无水乙醇的用量加倍，其他组分的用量不变）并检测。复检结果Ct＜40.0的样本为阳性，否则为阴性。
3. 内标RNP检测靶物质为正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA，用于对样本中RNA的提取和扩增检测过程进行有效监控。
如果该份样本的RNP检测 Ct值≥33.0，可能为以下原因：
3.1 未采集到足够的正常人上皮细胞，应重新采样。
3.2核酸提取过程异常，导致RNA损失，应重新提取。
3.3样本中存在RT-PCR抑制物质，可稀释后检测；
【检验方法的局限性】
1.样本中RNA浓度低于本产品的最低检出值（100copies/ml）时可能出现假阴性。
2.目前研究显示，发病后两日内取样检测，病毒RNA检出率最高，随发病时间的延长，病毒被清除，病毒核酸的检出水平迅速下降。因此应在发病后尽早采样，必要时可采用多部位取样检测。临床评价应结合其他临床症状和实验室检测指标进行判断。
【产品性能指标】
1.本品可最低检出100copies/ml稀释物。
2.本品对季节性流感（H1N1以及H3N2）灭活病毒、B型流感灭活病毒、高致病性禽流感灭活病毒（H5N1）RNA进行检测，结果为阴性。
【注意事项】
1.开始检测前请仔细阅读本说明书全文，并严格按照要求进行操作。
2.实验室配置和试验操作请按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》进行；整个检测过程应严格分区进行：PCR反应体系的配置区；标本处理、加样区；各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。
3.H7N9亚型禽流感为经呼吸道传播疾病，应按照相关要求进行。样本的采集、处理、运输和保存均存在一定生物危害。样本的采集、运输和保存应按照乙类传染病进行管理；标本的提取必须在生物安全二级实验室的负压生物安全柜中完成；试验中接触过标准品和对照品的废弃物品（如吸头）、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。
4.不同批号的试剂请勿混用，请在有效期内使用试剂盒。
5. 本产品仅用于体外诊断检测。
【参考文献】
1. 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）
2.《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版）》
3.《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）
【生产企业】
企业名称：北京金豪制药股份有限公司
生产地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号
注册地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号1号楼
邮政编码：100176
电话号码：010-67878866
传真号码：010-67881632
网 址：www.kinghawk828.com
【医疗器械生产企业许可证编号】京药监械生产许20050017号
H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒
（PCR-荧光探针法）说明书
【产品名称】通用名称：H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
英文名称：Detection Kit for Avian Influenza Virus Subtype H7N9 RNA (PCR-Fluorescence Probing)
【包装规格】大包装，48反应/盒
【预期用途】
流感病毒可分为甲（Ａ）、乙（Ｂ）、丙（Ｃ）三型。其中，甲型流感依据流感病毒血凝素蛋白（HA）的不同可分为1-16种亚型，根据病毒神经氨酸酶蛋白（NA）的不同可分为1-9种亚型，HA不同亚型可以与NA的不同亚型相互组合形成不同的流感病毒。而禽类特别是水禽是所有这些流感病毒的自然宿主，H7N9禽流感病毒是其中的一种。H7N9流感病毒既可以感染禽类，也可以感染人。人感染H7N9禽流感会出现严重肺炎，症状包括发烧、咳嗽、呼吸困难等。
本试剂盒适用于检测呼吸道样本、血清、肺组织等样本中H7N9禽流感病毒RNA，可用于该病毒感染的实验室诊断和宿主动物的监控。检测结果仅供研究，不用于临床诊断。
【检验原理】
本试剂盒基于实时荧光PCR技术，分别选取H7N9禽流感病毒的HA基因和NA基因保守区作为扩增靶区域，设计特异性引物探针，通过一步法实时荧光PCR体系扩增对H7N9禽流感病毒进行定性检测。反应体系中除特异性引物和特异性荧光探针外，还配以对应的PCR反应Buffer、逆转录酶、Hot-Start Taq酶、核苷酸单体（dNTPs）、Mg2+等成分，可实现对H7N9禽流感病毒核酸灵敏特异地检测。
【主要组成成分】
组分名称 规格 数量
PCR检测试剂 AIV H7 PCR反应液A 816µl/管 1
AIV N9 PCR反应液A 816µl/管 1
AIV H7N9 PCR反应液B 288µl/管 1
AIV H7N9内标溶液 240µl/管 1
质控品 阴性质控品 200µl/管 1
AIV H7N9阳性质控品 200µl/管 1
【储存条件及有效期】保存于-20±5℃，反复冻融次数＜5次，有效期9个月。
【适用仪器】ABI 7500、ABI 7300、LightCycler480等荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1 适用样本类型：呼吸道样本、血清、肺组织。
2 样品采集、保存与运送。
标本采集、保存、运送请遵循《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略》。
【检验方法】
1.核酸提取
建议取200µl液态样本进行核酸提取；组织样本可以研磨液进行提取操作。可采用中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸提取试剂盒，请按照试剂盒说明书进行操作；也可选择其他合适的商业化产品。本试剂盒中的内标溶液参与提取过程，若提取试剂盒中未说明内标的使用方法可在每200µl样本中加入4µl内标溶液后进行核酸提取。
本试剂盒中的阴性质控品参与提取，用于对环境进行监控；AIV H7N9阳性质控品不参与提取，用于PCR检测试剂的质控。
2.PCR扩增（ABI 7500仪器操作为例，ABI 7300、LC480等仪器参照此操作及仪器操作手册）
2.1分别配制AIV H7 RT-PCR反应体系和AIV N9 RT-PCR反应体系
2.1.1 AIV H7 RT-PCR反应体系配制
取适量PCR反应管（按AIV H7反应体系计算）；每管加入AIV H7 PCR反应液A 17µl、AIV H7N9 PCR反应液B 3µl（也可按照单个反应的用量，计算PCR反应液A、B各自所需总量，两者混匀后分装20µl于单个PCR反应管中）。
2.1.2 AIV N9 RT-PCR反应体系配制
取适量PCR反应管（按AIV N9反应体系计算）；每管加入AIV N9 PCR反应液A 17µl、AIV H7N9 PCR反应液B 3µl（也可按照单个反应的用量，计算PCR反应液A、B各自所需总量，两者混匀后分装20µl于单个PCR反应管中）。
2.2 于上述PCR反应管中分别加入处理后的阴性质控品、AIV H7N9阳性质控品、待测标本核酸各5µl，8,000rpm离心数秒，放入PCR扩增仪。
2.3探针检测模式设置为：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye：NONE，Reporter Dye2：Vic，Quencher Dye2：NONE， Passive Reference：NONE。反应条件设置为：50℃ 15min，1个循环；95℃ 15分钟，1个循环；94℃ 15秒→58℃ 45秒（收集荧光），45个循环。保存文件，运行。
3.结果分析
3.1 反应结束后保存检测数据文件。
3.2 分析条件设置：根据分析后图像调节Baseline的start值、stop值以及Threshold的Value值（用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis自动获得分析结果，在Report界面察看结果。
【质量控制】
阴性质控品：FAM检测通路扩增曲线无对数增长期，VIC检测通路扩增曲线为明显对数增长期；
阳性质控品：FAM检测通路扩增曲线有明显对数增长期，且FAM检测通道扩增曲线 Ct值≤32；
以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
【结果判定】
1.如果检测样品的AIV H7及N9 RT-PCR反应体系FAM检测通道均无扩增曲线或Ct值＞40，且在VIC检测通道均有对数增长期，可判样品为H7N9禽流感病毒阴性；
2.如果检测样品的AIV H7及N9 RT-PCR反应体系扩增曲线在FAM,VIC检测通道均有对数增长期且FAM检测通道Ct值≤40；可判样品为H7N9禽流感病毒阳性；
3.如果检测样品的AIV H7或N9 RT-PCR反应体系仅其中之一的扩增曲线满足判为阳性的要求，则需重复检测；若重复检测结果为H7及N9均阳性，则判H7N9禽流感病毒阳性；若重复检测结果仍为H7（或N9）阳性，则只能判禽流感病毒H7（或N9）亚型阳性，并建议以其他方法做进一步确认。
【检测方法的局限性】
1.样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关。
2.样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。
3.病毒在流行过程中的基因突变则也可能导致假阴性结果。
4.由于不同提取方法的原理不同，采用不同核酸提取试剂进行样本处理时核酸提取效率存在一定差异，本试剂盒推荐使用本公司生产的核酸提取试剂盒（离心柱法），用户可根据具体要求进行选择确认。
5.本检测结果仅供临床参考，如需确诊病例请结合临床症状及其他检测手段.
【产品性能指标】
根据产品分析性能评估结果，本试剂盒的分析灵敏度为1.0×103copies/ml。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体（甲型流感病毒H3亚型、甲型流感病毒H1亚型、乙型流感病毒、副流感病毒、禽流感H5亚型病毒、禽流感H9亚型病毒等）无交叉反应。
【注意事项】
1.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行（试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区），所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；
2.为试剂和标本准备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；
3.试剂使用前要完全解冻，8,000rpm离心数秒后使用；
4.标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；
5.实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外线灯处理工作台和移液器；
6.本试剂盒内阳性质控品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
【生产企业】企业名称：中山大学达安基因股份有限公司
生产地址：广州市高新技术产业开发区香山路19号；广州市高新技术产业开发区荔枝山路6号
邮 编：510665
电 话：020-32290789、8008304008
传 真：020-32068820
网 址：http://www.daangene.com
【医疗器械生产企业许可证编号】粤食药监械生产许20040999号
附件2
人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求
为加强人感染H7N9禽流感病毒核酸检测规范化管理，做好实验室生物安全管理工作，根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院第424号令，以下简称《管理条例》）、《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（卫生部45号令，以下简称《管理规定》）等有关要求，制定本标准。供医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。
一、样本采集
（一）进行人感染H7N9禽流感病毒相关样本（以下简称“样本”）采集的操作人员必须经过生物安全培训合格，并具备相应的操作技能。
（二）样本采集过程中，操作人员要加强防护，应当穿戴防护服、眼罩、N95及以上水平的医用防护口罩、双层医用乳胶手套、帽子等个体防护装备。
（三）用于样本采集的主容器必须采用优质塑料材质，且大小适合、带螺旋盖、内有垫圈、无菌、耐冷冻的密闭容器。样本采集后，主容器盖必须盖严、拧紧，表面应当擦拭消毒。
（四）对诊疗过程中采集的各种临床样本，医疗机构应当加强生物安全管理，在进行动态风险沟通与评估基础上，采取样本登记造册、专库存放、专人负责以及必要的消毒处理等较严格的安全及安保管理措施。
（五）样本采集过程中产生的医疗废物要分类收集，应当在产生地点进行压力蒸汽灭菌或可靠的化学消毒，然后按感染性、损伤性等医疗废物收集处置。
二、样本包装和运输
（一）负责样本包装和运输的人员应当经过感染性物质包装、运输相关的生物安全培训，并取得相应资格。
（二）运输样本必须采取三层包装系统，由内到外分别为主容器、辅助容器和外包装。
病毒培养物按照A类感染性物质进行包装运输，其他感染性物质按照B类感染性物质进行包装运输。
容器或包装材料应当达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》相应包装标准，符合防水、防破损、防外泄、耐高温、耐高压的要求。
（三）样本包装过程中，操作人员要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款的相关要求采取加强防护。
（四）操作人员应当规范包装检测样本：
1.应当在实验室核心操作区内对装有样本的主容器外表面进行仔细检查并擦拭消毒，确保无泄漏、表面无残留物，并在外表面标明样本编号、种类、姓名及采样日期等信息。用足够的吸收材料包裹主容器，然后放入辅助容器，拧紧（A类）或封严（B类）辅助容器，必要时消毒辅助容器外表面。若多个主容器装入同一个辅助容器时，必须分别包裹，防止彼此接触，并在多个主容器外面衬以足够的吸收材料。
2.应在实验室清洁区采用适当的衬垫材料将辅助容器固定在贴有统一标识的外包装箱内，冰排或制冷器件应放在辅助容器和外包装之间。样本送检单、样本接收证明、准运证书、运送人员资质证明、发送和接收人员信息等相关文件材料应当放入防水的塑料袋中，置于外包装箱内上方。
（五）样本运输前应当联系接收机构实验室，告知样本送检目的、样本种类、数量和预计送达的时间等。
（六）负责运输样本的医疗卫生机构，应当按照《管理规定》有关要求，向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心申请办理《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书》。在每次运输结束后，运输单位须将运输情况向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心书面报告。
（七）包装合格的样本（三层包装系统）可通过航空或陆路运输。陆路运输应专车运输，并由2名或以上经培训合格的人员护送。运输途中样本主容器应始终保持直立，运输车辆内应携带具备清单及有效物品的应急处置箱（包），其中包括个体防护装备、感染性材料溢洒处置器具、皮肤及创口处置器具、医疗废物收集器具以及“生物危险”、“禁止通过”等警示标识。有关单位或者个人不得通过公共电（汽）车和城市铁路运输相关样本。
三、样本接收和包装开启
（一）负责样本接收与包装开启的操作人员应具备相应的操作技能，通过生物安全培训并取得相应资质。
（二）样本包装的开启应在生物安全二级及以上级别的实验室进行。样本送检单、准运证书、人员上岗证等相关文件材料的核查、登记，以及相关风险沟通/评估和开具样本接收证明等工作应在实验室清洁区内进行。
（三）包装开启过程中，操作者要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款相关要求适时加强防护。
（四）实验室操作人员应规范接收检测样本、开启包装：
1.操作人员应当在生物安全柜内开启三层包装系统的第二层辅助容器，并仔细检查主容器表面有否破损、泄漏或残留物，发现异常情况应当立即执行实验室应急处置程序，同时登记并报告实验室负责人。
2.操作者应当在生物安全柜内消毒主容器表面，核对样本信息，进行下一步的实验室检测活动，或转移至指定的保存/保藏地点及位置。
（五）包装开启和样本核查结束后，应当在实验室清洁区完成交接手续，开具样本接收证明，交还外包装和辅助容器等。实验室操作人员应对所有异常情况进行详细记录，运输和接受样本的双方人员签字确认。
四、样本分装和检测
（一）负责样本分装、检测的操作人员应当具备人感染H7N9禽流感病毒相应的实验操作能力，经过生物安全培训，并取得培训合格资质。
（二）实验室用于人感染H7N9禽流感病毒检测的设备、设施必须运行良好，生物安全柜和压力蒸汽灭菌器应当年检合格。
（三）在生物安全二级实验室从事相关实验活动时，操作人员应当配戴眼罩、N95及以上水平的医学防护口罩，穿戴防护服、双层乳胶手套等个体防护装备。
（四）实验室生物安全等级要求：
1.疑似病例未经培养的临床样本应当在生物安全二级实验室的生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。
2.人感染H7N9禽流感病毒的分离培养应当在生物安全三级实验室进行。
3.动物感染实验应当在动物生物安全三级实验室进行。
（五）开展人感染H7N9禽流感病毒相关实验活动时，应当有２名以上的操作人员共同进行。
（六）实验过程中产生的医疗废物要分类收集，应在产生地点进行消毒灭菌，然后按医疗废物收集处置。
五、样本保存和销毁
（一）各医疗机构应当将阳性样本按照要求集中专库保存。
（二）阳性样本、分离物的保存及销毁应当按照《管理条例》等法规和规范性文件有关要求执行。
国家烟草专卖局关于印发《中国烟叶生产可持续发展规划纲要（2006—2010）》的通知
国家烟草专卖局关于印发《中国烟叶生产可持续发展规划纲要（2006—2010）》的通知
行业各直属单位，国家局、总公司机关各部门、各单位：
现将《中国烟叶生产可持续发展规划纲要（2006——2010）》印发给你们，请认真组织实施。
二〇〇六年二月十日
附 件：
《中国烟叶生产可持续发展规划纲要（2006——2010）》
中国烟叶生产可持续发展规划纲要
（2006——2010）
烟叶是烟草行业发展的基础，烟叶生产的可持续发展事关行业发展全局。为实现中式卷烟原料的有效供给，保证大企业、大品牌战略稳步实施，促进烟草行业的平稳发展，提升中国烟草总体竞争实力，特制定本纲要。
一、烟叶生产现状和面临的形势
（一）烟叶生产现状
我国烟叶产区分布广泛，生态环境多样，自然条件总体适宜，主产烟区集中在农村经济欠发达的省份和地区。1998年以来，按照“市场引导、计划种植、主攻质量、调整布局”的烟叶生产指导方针，以及“控制总量、提高质量、优化布局、优化结构”的烟叶工作重点，烟叶生产走上了规模稳定、质量提高、效益改善、秩序好转、管理加强的良性发展轨道，保持了平稳发展的良好态势。
烟叶规模稳定，产销协调夯实了行业持续、稳定、协调、健康发展的基础。近年来，烟叶种植面积稳定在1500万亩左右，烟农360万户左右，生产烟叶3600万担左右，收购加工能力基本配套，烟叶供求关系总体平衡。产区逐步向适宜区转移，生产集中度逐渐提高，30万担以上重点地市级公司烟叶收购量占全国的80%左右。形成了以烤烟种植为主，白肋烟、香料烟、地方名优晾晒烟种植为辅，植烟面积南方烟区约占80%、黄淮烟区约占14%、北方烟区约占6%的种植格局。
烟叶质量的不断提高为中式卷烟的发展奠定了良好基础。依靠科技进步，紧紧围绕烟叶质量这一核心，大力倡导自我创新及消化吸收国际先进技术。通过“四项技术”的成功研发和推广，形成了适宜我国生态条件的烟叶生产技术框架和技术标准，科学规划建设了一批优质烟叶生产基地和标准化生产示范区,部分地区烟叶质量已接近国际先进水平。
烟叶生产经营管理能力的进一步增强为烟叶生产可持续发展创造了适宜条件。实施总量控制，保持规模稳定，实现供求平衡，加强企业内部经营管理和成本费用控制，烟叶经营效益不断提高，企业自我发展能力不断增强。
烟叶流通秩序的好转为营造良好市场环境提供了可靠保障。通过强化内部监管，全面推行并规范合同制，整顿流通秩序，统一有序、适度竞争的市场环境初步形成，烟叶资源配置效率有效提升。
（二）面临的形势
随着农业大环境的变化和烟草行业体制改革的深化，影响烟叶生产平稳发展的不确定因素增多。烟叶生产可持续发展面临的问题和挑战主要表现为：一是基础工作薄弱，烟田水利设施、调制设施、基层站点等基础设施建设有待加强；二是部分烟区生态环境、土壤质量退化，建立基本烟田保护制度、改善烟田质量的必要性和迫切性日渐凸现；三是烟叶品质与卷烟工业企业的需求存在差距，烟叶供求区域性、结构性矛盾更为突出；四是烟农种烟积极性亟需稳定，服务烟农水平有待提高。
二、烟叶生产可持续发展的指导思想和总体目标
（三）指导思想
坚持以科学发展观统领烟叶发展全局，转变发展观念，创新发展模式，提高发展质量，坚持科学发展道路，努力保持烟叶生产的平衡、协调、可持续发展。坚持“市场引导、计划种植、主攻质量、调整布局”的指导方针，始终把稳定规模和提高质量作为烟叶工作的主要任务；坚持以人为本与和谐发展，认真解决好烟叶基础队伍和烟农队伍建设问题，完善工业反哺农业政策，认真解决好“三农”问题，不断增强烟区综合生产能力，推进烟区社会主义新农村建设；坚持服务中式卷烟战略的发展方向，以加强基础设施建设、管理创新和技术进步为突破口，不断提高中国烟叶的整体生产水平和有效供给水平，为烟草行业持续、稳定、协调和健康发展提供坚实基础。要重点把握好以下原则：
必须保持平稳发展。稳定规模是烟叶生产可持续发展的基本前提。要严格按照国家计划组织生产和收购，坚持总量控制，全面推行合同制，实现种植规模的基本稳定。要综合考虑我国卷烟工业的原料供应和出口需求，确保供需总量平衡和结构优化，避免“大起大落”，实现平稳发展。
必须不断深化改革。形成更具活力的体制环境是实现烟叶生产可持续发展的必然要求。要在国家烟草专卖制度下不断深化以市场为取向的改革，完善烟叶生产组织管理体系，理顺各环节利益分配关系，构建更加合理的价格形成机制，更大程度地发挥市场在烟叶资源配置中的基础性作用，不断提高资源配置效率。要加强宏观调控和企业内部监管，努力构建良好的市场秩序和环境。
必须提高科技和管理水平。实现烟叶生产的可持续发展要紧紧依靠科技与管理进步和劳动力素质的提高。要大力推进科技创新，推动技术与管理进步，切实加强人力资源建设，努力提高烟农队伍、烟叶生产技术辅导队伍和经营管理队伍的整体素质，着力加强烟叶科技创新体系建设，不断提高科技对烟叶生产的贡献率；探索推广“良好烟叶生产操作规范”，改进烟叶生产组织管理方式，提高烟叶工作整体水平。
必须加强统筹协调。烟叶生产要放在整个大农业和整个烟草产业体系中来统筹规划，努力做到自然、经济、生态以及烟草农工商协调发展。要有效整合各种资源要素，对自然、经济、管理、技术等各方面条件较好，具有比较优势的地区和企业进行重点扶持。要高度重视烟草“三农”问题，加大工业反哺农业力度，改善烟区环境和生产条件，提高烟叶质量和综合生产能力，维护烟农利益，推进和谐烟区和社会主义新农村建设。
（四）总体目标
以市场为导向，科学合理配置资源，加大主产区生态环境保护和基础设施建设力度，持续改进烟叶质量，提高烟叶可用性，确保烟叶种植规模、烟叶数量相对稳定，保持烟叶资源长期稳定供应，有效支撑和实现中式卷烟原料的有效供给。根据我国卷烟4000万箱的生产规模以及国际市场的需求，到“十一五”末，全国年种植烟叶面积保持在1500万亩左右，烤烟平均亩产达到130公斤以上，计划总收购量达到4000万担左右，年出口量300万担上下，工商库存维持在6000万担片烟左右，烟叶品质和加工质量总体上满足卷烟工业企业和出口的要求；白肋烟、香料烟等其他类型的烟叶能够满足市场的需求，保持烟叶总量供需平衡，努力实现烟叶生产的“稳定、优质、生态、安全”。
三、烟叶生产可持续发展的主要任务和措施
（五）稳定种植规模，建立基本烟田保护制度
稳定种植规模，实现供需平衡是烟叶生产的首要任务。要从我国卷烟市场总量扩张余地较为有限的客观实际出发，合理确定我国烟叶的种植规模和收购数量，切实加强总量控制，努力实现平稳发展。
稳定种植规模，首先要确保种植区域的相对稳定。要在总量控制的前提下，充分发挥市场配置烟叶资源的基础性作用，坚持“适度发展南方烟区，稳定巩固黄淮烟区和北方烟区”的总体指导方针，南方烟区遵循“区内调整布局，择优规划新区，适度扩大规模”原则，烟叶数量宜掌握在全国总量的80%～84%；黄淮烟区遵循“择优布局，重点扶持，稳定总量，平稳发展”原则，烟叶数量宜掌握在全国总量的10%～14%；北方烟区以生产优质填充型烟叶为主，适时调控种植规模，烟叶数量宜保持在全国总量的6%左右。加强和改善计划管理，不断优化烟叶生产力布局，将烟叶种植向自然生态条件适宜、能够轮作、技术基础较好、种烟效益较高和具有一定规模且有稳定市场前景的地区转移，最大程度地提高烟叶生产的集中度。至“十一五”末期，使全国30万担以上的地市级公司收购量比重达到90%左右，数量40个左右，其中100万担以上地市级公司稳定在10个以上；5万担以上种烟县达到400个左右，逐步减少5万担以下的种烟县。
稳定种植规模，必须保持烟农队伍的相对稳定。要进一步全面推行合同制，把合同制作为落实种植计划的关键措施，充分发挥合同落实国家计划、指导烟农生产的积极作用，切实维护合同的严肃性，维护烟叶生产和流通秩序的稳定；通过签订种植收购合同，严格履行合同条款，为烟农提供优质服务，维护烟农正当利益，稳定烟农队伍，保持烟叶总量稳定。至“十一五”末期，全国种植收购合同数量稳定在350万份上下。
稳定种植规模，必须保持种烟田块的相对稳定，建立基本烟田保护制度。我国常年种植烟叶1500万亩左右，考虑轮作要求，遵循生态优先、相对集中的原则，在生态环境优越、水土资源丰富、社会经济适宜的烟区，选择土壤营养协调的宜烟田块，依照法定程序、行政程序、契约合同或村民自治等形式，确定基本烟田保护区，遵循全面规划、合理利用、用养结合、严格保护的方针，建立基本烟田保护制度。利用信息技术、遥感技术等现代化手段，规范基本烟田管理，建立基本烟田数据档案。至“十一五”末期，全国规划保护基本烟田3000万亩左右，其中南方和黄淮烟区占94%左右，北方烟区占6%左右。
（六）改善环境条件，加强烟叶基础设施建设
基本烟田保护区要建立以烟为主的耕作制度，突出烟草在整个轮作制度中的主体地位，根据当地光、热、水资源、作物的生育期、轮作制度中养分的平衡协调供应等因素，科学安排茬口、轮作作物和耕种方式，到“十一五”末轮作烟田面积要达到种烟总面积的50%以上，初步解决轮作问题。
加大基本烟田土壤改良力度，重点解决部分烟田结构不良、酸碱不当、营养失调、病原量多等问题；通过合理轮作、秸秆还田、绿肥掩青、等高种植、规范农用化学品使用等措施，保护和培肥地力，提高烟田综合生产能力。建立科学的基本烟田开发利用和治理保护的监测管理机制，通过对烟田生态系统的结构、功能及其变化趋势进行连续监控，构建各具特色、持续平衡的烟叶生产生态体系、基本烟田质量管理和监测信息系统及预警体系。
要按照“充分论证、科学规划、编制预算、筹集资金、搞好试点、分期实施、规范运作、加强监管、确保效益”的指导思想，以及“加强规划、明确重点，抓好试点、稳步推进、明确责任、落实到户、加强检查、搞好监管”的建设原则，紧紧围绕基本烟田，科学确定标准，因地制宜地开展基础设施建设。按照区域水资源状况、烟草需水规律以及相关技术标准，以建设小水窖、小水池、小水坝、机（水）井以及配套沟渠、管网为重点，加快基本烟田水利设施建设，全面实现水利设施配套；以构建全国集约化烘烤体系为重点，逐步实现烟叶集约化烘烤设施配套；优化烟叶基层站、复烤企业布局，加强标准化烟叶基层站建设，完善烟叶收购、仓储、加工设施，逐步形成完整的烟叶物流系统；以减轻烟农劳动强度为重点，因地制宜地推行烟用小型农机具，逐步实现烟叶生产半机械化、机械化作业；以方便烟农机耕作业为重点，逐步完善烟田路网建设。
至“十一五”末，新建、完善一批集蓄、灌排水设施，保证3000万亩基本烟田灌排需要；新建、改建一批集约化烘烤设施，保证50%以上的烟叶实现集约化烘烤；优化烟叶基层站资源配置，完善2500个左右标准化基层站基础设施建设，满足组织烟叶生产、收购的需求；优化烟叶加工资源配置，形成合理的打叶复烤企业布局，满足4000万担烟叶加工要求；基本实现烟区路网配套；普及推广烟用小型农机具。
（七）提高质量水平，加快技术创新推广步伐
持续提高烟叶质量水平是烟叶生产的重要目标之一。要围绕提高烟叶品质这个中心，切实加强技术创新和技术推广能力建设。逐步完善以研究院所、行业试验站、技术中心以及基层技术推广机构为主体，社会智力资源广泛参与的烟叶技术创新推广体系；构建烟草种质资源信息平台、烟叶质量评价及有效使用信息平台、烟区生态环境及烟叶生产基础设施信息平台，烟区综合减灾减害技术四大信息平台；重点解决对烟叶生产有重大影响的基础性、关键性和前瞻性的技术问题，努力培育烟叶生产核心技术，提高核心竞争力。
加强育种工程研究，育引结合，加快新品种选育进程，着力培植区域特征明显，适应知名品牌、名优品牌配方需求的优良品种，加强配套生产技术研究，最大程度地挖掘品种的质量潜力；深化研究以烟为主的耕作栽培技术，建立基本烟田评价和质量管理体系，加强水分及养分全周期综合管理研究，为优质烟叶生产提供良好可靠的自然条件；建立健全病虫害综合治理技术体系，实施有害生物区域统防统治工程，控制病虫草害，保障优质烟叶生产；建立灾害天气等自然灾害预警机制，加强预警技术研究和能力建设；研发智能化密集式烘烤设备、设施和科学烘烤工艺，不断提高烤后烟叶质量；探索卫星遥感等现代信息技术在烟叶生产与管理中的应用研究；加强叶组加工技术、叶组配方技术研究，改进复烤加工工艺，提高烟叶有效使用水平；推进烟叶目标质量与配套生产技术体系研究。
加快科技成果转化，加大适用技术推广应用力度，不断增加烟叶生产科技含量。到“十一五”末，全国烟田漂浮育苗移栽面积达到80%以上，测土平衡施肥面积达到90%以上，集约化烘烤技术应用达到50%以上，病虫害预测预报网络覆盖面积达到90%以上，其中统防统治面积占75%以上，优质烟叶生产示范面积达到10%以上，烟叶生产科技贡献率达到60%左右。
（八）转变发展观念，努力提高经营管理水平
要树立集约化经营的管理思想，坚持走内涵式发展的道路。转变粗放的烟叶生产管理方式，实行精细化管理，积极推行烟叶生产全面质量管理，对烟叶生产和经营的全过程进行控制，走标准化、规模化、专业化发展之路，努力提高企业自我发展的能力，推进经济增长方式的转变。
保持烟叶生产稳定，提高烟叶工作整体水平，必须重心下移、着眼基层、突出服务、加强基础。产区县级烟草部门和烟叶基层站作为行业的基层单位，要突出烟叶生产收购、技术推广、服务烟农的功能和作用，完善基础设施，切实加强执行能力建设。要加强对基层技术辅导人员的考核，稳定基层技术辅导队伍。规范基层站工作流程，形成一套完整、规范和标准化的基层站工作流程和作业制度，加强基层队伍管理，提高技术推广到位率和整体工作水平；要规范产前投入物资或补贴资金管理，加强烟叶的经营核算工作；要强化信息技术运用，加强烟叶物流管理，提升烟叶经营管理水平。
以人为本，优化用人机制，健全激励约束机制，建立教育培训制度，逐步培养高素质的烟叶生产、经营管理以及烟农队伍。要以优化烟叶人才资源配置为目的，建立和完善烟叶人才任用选拔制度，加快建立“进得来，留得住，出得去”的用人机制；推行专业技术职务聘任制和职业资格证书制度，以烟叶人才资源能力建设为核心，建立以能力和业绩为主、符合烟叶工作实际的科学的人才评价机制；加快分配制度改革，探索推行评聘分离、竞聘上岗、薪酬结合，明确岗位职责、工作目标、培训考核机制和奖惩办法，建立权、责、利明确的有效激励和约束机制，充分调动和保护基层技术辅导人员的积极性。
要进一步认真落实国家烟草专卖局、中国烟草总公司（以下简称国家局、总公司）《关于加强烟叶技术推广队伍建设的意见》的精神，按照“定编定岗、公开招聘、持证上岗、岗位培训、以岗定酬”的原则，积极推进基层烟叶技能人员、专业技术人才和经营管理队伍建设。到“十一五”末期，要实现每300～400亩烟田配备1名烟叶生产技术辅导员，并持证上岗；烟叶基层站站长应具有中专以上学历，取得高级技能及以上资格证书，或具有农艺师任职资格；每个烟叶基层站要配备至少1名农艺师或技师，30万担以上地市级公司要配备至少1名高级农艺师。
（九）突出服务意识，提高专业化服务水平
要坚持市场导向，增强服务意识，提高服务水平。烟农、烟草公司、卷烟工业企业共同构成烟叶生产经营的产业链和价值链，产区烟草公司提供的服务是实现烟叶价值的桥梁与纽带。
烟农是我国烟叶生产的基本主体，烟农的积极性最终决定烟叶生产规模和质量水平。要不断提高对烟农的社会化、专业化服务水平，解决种烟比较效益、劳动强度和技术复杂性等方面的问题，为烟农营造相对简单、轻松和放心的种烟环境，保持农民种烟积极性的相对稳定。建立烟农定期培训制度，完善基层技术推广体系，配套相关培训设施，提高服务烟农水平。
进一步创新烟叶生产组织方式，坚持以家庭承包经营为基础、统分结合的双层经营体制，根据自愿、有偿的原则引导烟农依法流转土地承包经营权，积极发展适度规模种植，重点发展10亩以上的种烟户以及多种形式的烟叶经济合作组织，建设一批适度规模种植专业村。坚持烟叶合同种植方向，不断深化完善合同制，规范合同签订的程序，按照“全面推广、一次到位、明确权责、完善提高”的原则与烟叶种植主体签订好合同。探索完善“烟草公司+农户”、“烟草公司+卷烟工业企业+农户”等烟叶产业化模式，完善烟叶生产社会化、专业化服务体系，提高烟叶生产的专业化和组织化程度，逐步解决烟叶千家万户种植与卷烟品牌规模生产的矛盾。到“十一五”末，力争10亩以上合同种植总面积达到50%左右，逐步减少3亩以下烟农种植比例。
产区烟草公司要根据卷烟工业企业对烟叶质量和供应的要求，在烟叶质量特征培育、质量控制和持续稳定供应等方面提供优质服务。要通过履行购销合同规范工商交接，保证工商交接等级合格率和等级纯度，为卷烟工业企业提供足量优质合格原料。
要树立全球烟叶资源统筹配置观，在立足国内产能资源的同时，在国外建立优质烟叶采购和生产基地，稳定进口烟叶货源；选择生态环境条件适宜地区，通过配套基础设施、创新生产及管理技术，建立稳定的优质烟叶生产基地，利用国内、国际两个市场为中式卷烟的发展夯实原料基础。
（十）不断深化改革，完善烟叶生产体制和机制
要不断深化改革，努力为烟叶生产的可持续发展提供有力的体制、机制和政策保障。进一步强化市场取向，建立市场机制与宏观调控有机结合的可行方式，形成既适应专卖制度要求又适应市场经济发展需要的生产经营体制。完善适度竞争机制，在坚持总量控制的前提下，建立以市场需求为核心的计划调控机制，不断提高资源配置效率。
产区地市级公司与卷烟工业企业要遵循互动、互信、双赢的原则，以市场为导向，以共同发展为目标，根据中式卷烟品牌配方个性化需求，制定规划，明确目标，积极行动，多种形式加快厂办基地建设步伐。一是卷烟工业企业和产区公司联合投资，共同开发烟田，风险共担，效益共享，主要满足工业企业的需要；二是卷烟工业企业与产区建立长期稳定的技术交流和供货关系，定点生产，定量供应；三是投资打叶复烤企业，参与其改制改造、仓库建设等，并提供管理和技术的支持，保证卷烟工业企业生产需要。卷烟工业企业要加大对基地的支持力度和参与程度，基地要确保烟叶质量满足卷烟生产配方的要求，使厂办基地工作取得实质性的进展，形成稳定的产销关系，力争“十一五”末达到重点地市级公司90%的烟叶基地化生产，重点卷烟企业90%的烟叶原料基地化供应。
要完善烟叶价格政策，理顺利益分配关系。按照《中华人民共和国烟草专卖法》要求，认真执行烟叶国家统一定价政策，维护烟叶价格的严肃性；综合考虑市场供求关系、烟叶成本费用、国际烟叶市场价格、国家宏观经济政策和烟区社会经济条件等因素，合理确定烟叶收购和调拨价格，以保障烟农收入为基点协调各方利益关系，努力实现烟叶生产经营的良性发展；维护烟叶价格政策的稳定性和连续性，科学确定不同区域、不同等级的烟叶价差，引导烟叶生产向优质化方向稳步发展；重视抓好价格制定和调整的基础工作，建立健全烟叶成本信息采集与分析系统，加强完善烟叶价格的宏观调控和管理，使制定的价格更加符合烟叶生产实际。
要积极制定“工业反哺农业”政策，加大烟叶生产投入扶持力度，帮助烟农消化部分生产成本，维持合理的种烟比较效益；要充分调动各方的投入积极性，建立烟叶生产长效投入机制，形成烟草系统、地方政府和烟农共同投资的良好机制，努力增强烟叶产区的自我发展能力；不断优化投资结构，集中必要的资金，有针对性地扶持重点产区、重点领域和重点项目，切实提高资金使用效率；加强对补贴资金的监督和管理，避免损失浪费和无效投入，杜绝投资建设过程中的各种不规范行为。
建立风险救助机制，在有条件的地区积极探索建立和完善烟叶生产风险基金制度，对发生重、特大自然灾害的烟农给予适当补助，减少种烟的风险与损失，增强烟农信心和稳定烟农队伍；积极引入烟叶商业保险，推动烟草公司与烟农共同投保制度，不断扩大烟叶保险种类和保险范围；建立完善烟叶储备调节机制，积极应对国际、国内烟叶市场波动对行业整体发展的不利影响。
打叶复烤企业要依据全国烟叶资源状况，合理安排布局。必须坚定不移地按照国家局、总公司制定的“工商联手、共同投资”的要求，进行体制改革，组建有限责任公司，切实按公司制要求建立法人治理结构；国家局、总公司鼓励打叶复烤企业间输出管理与技术，有条件的可积极探索联合重组、托管等改革方案。必须严格执行《中华人民共和国烟草专卖法》，按照签订的加工合同进行复烤加工，严禁无合同、超合同加工，坚决杜绝加工系统外烟叶；要不断强化各项基础管理，稳定、提高产品质量。
（十一）加强组织领导，切实保证纲要贯彻落实
要统一思想，提高认识，切实把烟叶生产可持续发展规划作为一项事关行业全局的重大战略任务来抓。国家局、总公司成立烟叶生产可持续发展工作领导小组，指导、监督全国烟叶生产可持续发展工作；有关省级局、省级公司要设立专门机构，按照本纲要的精神和要求，结合实际，科学制订本省烟叶生产可持续发展规划，认真组织实施。在规划实施过程中，要尊重农民意愿，尊重自然规律和市场规律。要积极探索市场经济条件下规划实施的有效机制，努力改善和加强宏观调控，切实发挥规划的导向作用。要积极争取各级政府及有关部门的支持，加强综合协调，确保规划目标和任务得以顺利完成。
在本纲要实施过程中，将根据社会经济状况和行业发展环境的变化，适时调整预期发展目标和政策措施。为实现本纲要提出的目标，国家局、总公司将分阶段制定配套文件并陆续发布。
